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鲫鳍细胞的原、传代培养与水生动物细胞对蛙病毒敏感性的分析
雷存科
Subtype硕士
Thesis Advisor张奇亚
2018
Degree Grantor中国科学院水生生物研究所
Abstract细胞培养目前仍然是病毒学研究基本和必备的方法。水生动物细胞可用于病毒的分离、鉴定、敏感性测定、抗病毒药物筛选和病毒基因功能分析。因此,本文针对鲫鳍细胞原代、传代培养及冻存;不同病毒对水生动物细胞敏感性的分析等进行研究。主要研究内容如下:1. 鲫鳍细胞的原、传代培养。对鲫鳍条组织进行原代、传代培养。第7天就有鲫鳍细胞从组织块附近迁出并贴于细胞培养瓶的壁上,自2016年4月到目前为止,鲫鳍细胞已传代60代以上,原始的单层细胞在一个月后形成,形态不均一。20代后,传代的鲫鳍细胞呈上皮状,第3天可形成单层细胞。其最适生长条件为含10%血清的M199培养基于25 ℃ 条件下培养。2. 水生动物细胞对蛙病毒敏感性的分析。利用3个不同物种的水生动物细胞系,包括爪蟾肾细胞(Xenopus kidney cell line, A6)、大鲵胸腺细胞系(Chinese giant salamander thymus cell line, GSTC)和鲤鱼上皮瘤细胞系(Epithelioma papulosum cyprini cell line, EPC),分别对沼泽绿牛蛙蛙病毒(Rana grylio virus, RGV)和大鲵蛙病毒(Andriasda davidianus ranavirus, ADRV)的感染结果,包括细胞病变显微形态、病毒滴度、细胞病变与不同感染时间的相关性等。显示,在光镜下可见感染病毒的细胞发生病变,A6 和 EPC 细胞肿胀或破裂;GSTC 细胞收缩或聚在一起形成多层。结果还显示同种水产动物细胞系对不同蛙病毒的敏感性不同,在A6, EPC 和 GSTC细胞中,RGV的滴度分别为103.6、105.9 和 106.6 TCID50/mL;ADRV的滴度分别为104.3、105.4 和106.1 TCID50/mL,表明GSTC细胞系对两种蛙病毒都更敏感。研究为后续蛙病毒致病机理提供有用的信息和重要实验材料。3. 重组蛙病毒Δ12L-ADRV的构建。通过荧光标签共进行十一轮挑斑筛选,获得将ADRV 12L替换为p50-EGFP的重组蛙病毒Δ12L-ADRV。一步生长曲线结果表明野生型和重组病毒的滴度在感染后24小时无明显差异;而在36-48小时重组病毒滴度显著低于野生型,空斑实验显示重组病毒形成空斑变小。
Language中文
Document Type学位论文
Identifierhttp://ir.ihb.ac.cn/handle/342005/39078
Collection学位论文
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GB/T 7714
雷存科. 鲫鳍细胞的原、传代培养与水生动物细胞对蛙病毒敏感性的分析[D]. 中国科学院水生生物研究所,2018.
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