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母源Slbp2是斑马鱼早期胚胎发育核分裂和复制依赖型组蛋白表达所必需
何文霞
Subtype博士
Thesis Advisor桂建芳
2018
Degree Grantor中国科学院水生生物研究所
Abstract在后生动物中,茎环结合蛋白(stem loop binding protein,SLBP)通过与复制依赖性组蛋白mRNA的茎环结构结合,调控复制依赖性组蛋白mRNA代谢的所有过程。斑马鱼有两个茎环结合蛋白(slbp1和slbp2),其中slbp1是视网膜神经发生所必需的;而slbp2在斑马鱼中的表达和功能仍然未知。在本研究中,我们首先分析了斑马鱼slbp2的表达和定位,结果表明斑马鱼slbp2的转录本和蛋白都特异表达于卵巢。Slbp2从初级卵母细胞开始表达,在皮质泡期卵母细胞表达达到峰值,从卵黄形成期卵母细胞开始下降,到受精后50%下包完全检测不到。Slbp2的表达特征表明它是一个母源因子,并且在胚胎发育过程中没有合子型产物生成。为了揭示它的功能,我们利用CRISPR/Cas9技术对斑马鱼slbp2进行了敲除并得到母源合子F3代纯合子突变体(MZslbp2Δ4-/-)。母源Slbp2的缺失导致斑马鱼早期核卵裂异常并最终导致胚胎发育停滞于MBT(midblastula transition)时期。这些突变体的表型可以被slbp2 转基因所挽救。通过野生型和MZslbp2Δ4-/-胚胎之间蛋白组和转录组的比较分析,鉴定了一批差异表达的蛋白和基因,其中大多数是组蛋白和核糖体蛋白。与256细胞期和高囊胚期的野生型胚胎相比,四种复制依赖型组蛋白包括H2a、H2b、H3和H4在MZslbp2Δ4-/- 突变体胚胎中都显著下调,然而组蛋白变体h2afx显著上升。体外实验证明斑马鱼Slbp2可以结合组蛋白mRNAs茎环。MZslbp2Δ4-/-突变体胚胎的缺陷可以被过量表达H2b部分挽救。此外,许多核糖体蛋白,如三种核糖体P蛋白,被证实在MZslbp2Δ4-/-突变体胚胎中表达量显著上升,这些结果暗示在MZslbp2Δ4-/-突变体胚胎中,由于不正常核分裂可能导致了蛋白合成受到干扰。总之,本研究揭示母源Slbp2对斑马鱼胚胎发育过程中的早期核分裂和复制依赖型组蛋白表达起着非常重要的作用。
Language中文
Document Type学位论文
Identifierhttp://ir.ihb.ac.cn/handle/342005/39002
Collection学位论文
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GB/T 7714
何文霞. 母源Slbp2是斑马鱼早期胚胎发育核分裂和复制依赖型组蛋白表达所必需[D]. 中国科学院水生生物研究所,2018.
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