IHB OpenIR  > 学位论文
大鲵蛙病毒基因ADRV-96L的克隆表达及功能鉴定
张锐
Subtype硕士
Thesis Advisor张奇亚
2018
Degree Grantor中国科学院水生生物研究所
Abstract大鲵蛙病毒(Andrias davidianus ranavirus ,ADRV)是导致中国大鲵致死性病毒病的重要病原。在已测定ADRV全基因组序列,并推导出其基因ADRV-96L可编码含有315个氨基酸的腺苷三磷酸酶(ATPase)的基础上,本文对ADRV-96L进行了克隆表达、产物的理化特性测试及其生物学作用进行了初步分析,结果如下:1. ADRV-96L的表达及其产物纯化:将所构建的原核表达重组质粒pET 32a (+)-96L转化大肠杆菌DE3菌株,并分别取未诱导或经IPTG诱导的菌上清及沉淀进行SDS-PAGE电泳,结果显示一条52kDa的蛋白条带明显有差异表达,该蛋白与预期的ADRV-96L融合蛋白的分子量相符,表明ADRV-96L可经IPTG诱导表达;将经超声波破碎后离心的菌上清液通过镍离子金属鳌合亲和层析柱 (Ni-NTA His-Bind) 纯化,用不同浓度的咪唑液洗脱,辅以分光光度计检测蛋白含量及超微量ATPase测定方法测酶活力,所收集样品中最高的酶活力可达7.47 U/mgprot。2. ADRV-96L理化特性测试:分别就pH、温度、有机化合物等理化因子对ADRV-96L酶活力的影响进行了测试,结果显示最适反应pH为8.5,最适反应温度为40℃;用10%的甲醇、乙醇、甘油和氯仿等处理对酶活力的抑制作用较弱,约80%的酶活力仍保留;而用1% Tween 20处理对酶活力的抑制作用显著,可降至29%;另外测试结果还显示不同浓度和种类的金属离子对酶活力的影响程度不同。3. ADRV-96L作用分析:分别测定了转染重组质粒pcDNA3.1-96L的大鲵胸腺细胞系(Chinese giant salamander thymus cell line,GSTC)和对照组细胞的生长曲线,结果显示从第二天开始至第四天,转染重组质粒pcDNA3.1-96L的细胞量显著高于转染空质粒pcDNA3.1的细胞,表明ADRV-96L对GSTC细胞的生长和增殖具有促进作用。
Language中文
Document Type学位论文
Identifierhttp://ir.ihb.ac.cn/handle/342005/38984
Collection学位论文
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GB/T 7714
张锐. 大鲵蛙病毒基因ADRV-96L的克隆表达及功能鉴定[D]. 中国科学院水生生物研究所,2018.
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