IHB OpenIR  > 学位论文
雨生红球藻虾青素酰基转移酶基因的鉴定
曹黎
Subtype硕士
Thesis Advisor韩丹翔
2018
Degree Grantor中国科学院水生生物研究所
Abstract虾青素是一种次生类胡萝卜素,作为一种高效抗氧化剂和着色剂,在医药、化工及水产养殖等行业有巨大的应用前景。一些微藻种类在逆境条件下能够合成虾青素,对逆境条件下生长的光合生物具有重要的保护作用。雨生红球藻Haematococcus pluvialis是一种单细胞绿藻,在高光、高盐和缺氮等胁迫条件下可以累积虾青素,其含量可达到细胞干重的4-6%。因此它不仅是目前天然虾青素的最主要的来源,也是研究单细胞光合生物虾青素生物合成的模式物种。已有的研究表明雨生红球藻虾青素的生物合成受到虾青素酰基化过程的正反馈调节,即虾青素单体在内质网的酰基化能够有效解除产物反馈抑制效应,促进反应向正向进行,而这一反应很有可能是由甘油二酯酰基转移酶(Diacylglycerol Acyltransferase,DGAT)所催化。因此,本研究的主要目标是回答雨生红球藻的DGAT是否具有催化虾青素酰基化的功能这一科学问题。前期实验室已经通过转录组测序技术(RNA-seq)鉴定了两种类型的五个拷贝的DGAT,其中包括一个DGAT1和四个DGAT2,并通过雨生红球藻的cDNA文库克隆得到了基因编码区全长序列。本研究拟通过建立虾青素酰基转移酶的体外和体内鉴定体系,分析前期得到的五个DGAT是否具有虾青素酰基转移酶的功能。本研究首先利用分离得到的雨生红球藻的内质网成功地建立了一个体外的虾青素酰基转移酶酶活测定体系,并通过添加含有重组HpDGAT的酵母细胞的微粒体来鉴定具有编码虾青素酰基转移酶功能的DGAT。结果显示HpDGAT1和HpDGTT2的添加能显著增加体系中虾青素酯的含量,初步表明HpDGAT1和HpDGTT2可能催化雨生红球藻中虾青素酰基化功能。同时,本研究还采用了一株无质粒的虾青素生物合成大肠杆菌,并在其体内成功表达了密码子优化后的HpDGAT1和HpDGTT2编码基因,高效液相色谱分析结果表明仅有HpDGAT1表达菌株具有合成虾青素酯的能力。本研究首次通过体外和体内研究揭示了DGAT1具有催化类胡萝卜素(虾青素)酰基化的功能,拓宽了对HpDGAT1多功能性的认识,为进一步深入理解虾青素合成在代谢水平的调控奠定了基础。
Language中文
Document Type学位论文
Identifierhttp://ir.ihb.ac.cn/handle/342005/38981
Collection学位论文
Recommended Citation
GB/T 7714
曹黎. 雨生红球藻虾青素酰基转移酶基因的鉴定[D]. 中国科学院水生生物研究所,2018.
Files in This Item:
There are no files associated with this item.
Related Services
Recommend this item
Bookmark
Usage statistics
Export to Endnote
Google Scholar
Similar articles in Google Scholar
[曹黎]'s Articles
Baidu academic
Similar articles in Baidu academic
[曹黎]'s Articles
Bing Scholar
Similar articles in Bing Scholar
[曹黎]'s Articles
Terms of Use
No data!
Social Bookmark/Share
All comments (0)
No comment.
 

Items in the repository are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.