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杀鱼爱德华氏菌Ⅲ型分泌系统效应分子EseJ 抗黏附的分子机理研究
张倩
Subtype硕士
Thesis Advisor谢海侠
2018
Degree Grantor中国科学院水生生物研究所
Abstract杀鱼爱德华氏菌(Edwardsiella piscicida)是革兰氏阴性胞内致病菌,感染宿主范围广,能感染牙鲆、大菱鲆等多种养殖鱼类,引起鱼类出血性败血症,由爱德华氏菌引起的疾病称为爱德华氏菌病(Edwardsiellosis)。Ⅲ型分泌系统(Type Ⅲ Secretion System,T3SS)是杀鱼爱德华氏菌重要的毒力岛之一,由34个开放阅读框组成,其编码的Ⅲ型分泌系统效应分子进入宿主细胞后,可改变宿主信号通路,逃逸宿主的免疫防御,使其能在宿主细胞内存活与繁殖。Ⅰ型菌毛是革兰氏阴性菌细胞的表面附属构造,Ⅰ型菌毛基因簇编码的FimH是细菌黏附素的一种,FimH通过与宿主细胞表面D-甘露糖受体的结合,介导细菌对宿主的黏附。EseJ是杀鱼爱德华氏菌Ⅲ型分泌系统的效应分子,前期研究表明EseJ抑制杀鱼爱德华氏菌对EPC细胞的黏附,eseJ缺失突变株的黏附能力是野生株的3-5倍。然而,eseJ影响细菌黏附的分子机理目前仍不清楚。本研究围绕EseJ抗黏附的分子机理开展研究工作,主要研究结果如下: 一、EseJ抑制黏附的表型与鞭毛蛋白无关eseJ缺失后鞭毛蛋白FliC分泌增加,但fliC的缺失不影响杀鱼爱德华氏菌对鲤上皮瘤细胞(EPC)的黏附,表明ΔeseJ的高黏附表型与鞭毛蛋白无关。 二、EseJ下调杀鱼爱德华氏菌Ⅰ型菌毛基因簇的转录黏附实验发现EseJ在细菌胞内抑制黏附,且抑制程度与胞内EseJ蛋白水平呈正相关关系。RNAseq发现eseJ缺失后Ⅰ型菌毛蛋白FimA转录水平升高,实时荧光定量方法表明EseJ负调控Ⅰ型菌毛基因簇;杀鱼爱德华氏菌的黏附能力与Ⅰ型菌毛FimH蛋白水平呈正相关关系。 三、EseJ的C端调控Ⅰ型菌毛EseJ C端缺失突变株与ΔeseJ对EPC黏附水平一致;EseJ C端缺失突变株中Ⅰ型菌毛转录水平相比于野生型有显著性升高。故,EseJ C端参与对Ⅰ型菌毛的转录调控。 四、杀鱼爱德华氏菌在巨噬细胞内的繁殖与Ⅰ型菌毛蛋白无关eseJ缺失突变株不能在巨噬细胞内存活与繁殖,eseJ负调控Ⅰ型菌毛蛋白,但fimA和fimH的缺失不影响杀鱼爱德华氏菌在巨噬细胞内的繁殖。
Language中文
Document Type学位论文
Identifierhttp://ir.ihb.ac.cn/handle/342005/38980
Collection学位论文
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GB/T 7714
张倩. 杀鱼爱德华氏菌Ⅲ型分泌系统效应分子EseJ 抗黏附的分子机理研究[D]. 中国科学院水生生物研究所,2018.
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