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骆驼抗G250蛋白胞外区纳米抗体的制备及鉴定
胡明; 朱通; 余志平; 李周全; 范校周; 郭燕丽; 江军; 王洛夫
2017
Source Publication第三军医大学学报
ISSN1000-5404
Volume39Issue:06Pages:541
Abstract目的制备能与肾癌相关抗原G250胞外区特异性结合的纳米抗体。方法通过瞬时转染方式将包含G250蛋白胞外区基因片段的质粒导入到真核细胞HEK 293F中表达G250胞外区,以该重组蛋白免疫新疆双峰驼,构建噬菌体展示纳米抗体库。通过体外定向筛选,得到能与G250蛋白胞外区特异性结合的噬菌体,以Monoclonal phage ELISA方法筛选出具有结合活性的噬菌体克隆。通过细胞ELISA和流式细胞仪再次验证淘选到的纳米抗体的细胞结合活性。结果测序证明编码G250的重组DNA片段序列正确, Western blot检测结果证实G250重组蛋白成功表达。通过免疫新疆双峰驼,成功构建了库容为2.87×10~9的噬菌体展示骆驼VHH免疫文库。在体外对免疫纳米抗体库进行3轮固相筛选,使具有结合活性的噬菌体克隆得到了有效富集,阳性率高达54.3%。经过抗原ELISA、细胞ELISA鉴定,筛选出3个具有细胞结合活性的纳米抗体噬菌体克隆,取其中结合活性最高的Nb-G5进行表达、纯化,产量为1.5 mg/L培养物,流式细胞仪检测结果证实Nb-G5与G250表达阳性的细胞具有很强的特异性结合能力。结论从纳米抗体库中淘选得到了在分子和细胞水平均能与G250蛋白胞外区特异性结合的纳米抗体。
Keyword纳米抗体 肾癌相关抗原G250 噬菌体展示 骆驼
Language英语
Document Type期刊论文
Identifierhttp://ir.ihb.ac.cn/handle/342005/37906
Collection其他_期刊论文
Affiliation中国科学院水生生物研究所
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GB/T 7714
胡明,朱通,余志平,等. 骆驼抗G250蛋白胞外区纳米抗体的制备及鉴定[J]. 第三军医大学学报,2017,39(06):541.
APA 胡明.,朱通.,余志平.,李周全.,范校周.,...&王洛夫.(2017).骆驼抗G250蛋白胞外区纳米抗体的制备及鉴定.第三军医大学学报,39(06),541.
MLA 胡明,et al."骆驼抗G250蛋白胞外区纳米抗体的制备及鉴定".第三军医大学学报 39.06(2017):541.
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