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蛙病毒同源蛋白rgv27r和adrv85l的表达及其免疫原性分析
明成玥1; 柯飞2; 张奇亚1
2019
Source Publication病毒学报
ISSN1000-8721
Volume35Issue:6Pages:926
Abstract

沼泽绿牛蛙病毒(Rana grylio virus,RGV)和大鲵蛙病毒(Andrias davidianus ranavirus,ADRV)同属虹彩病毒科(Iridoviridae)蛙病毒属(Ranavirus)成员,是引起水产动物高死亡率的病原。其同源早期蛋白RGV-27R和ADRV-85L与蛙病毒代表株蛙病毒3型(Frog virus 3,FV3)25R基因所编码的大小为31 kD的早期蛋白P31K(FV3-P31K)同一性超过99%。我们在观察和比较RGV与ADRV感染大鲵胸腺细胞(Giant salamander thymus cell,GSTC)显微病变的基础上,将ADRV-85L和RGV-27R基因分别克隆到原核表达载体pET-32 a与pMAL-p5X中,转化宿主菌E·coli BL21(DE3)并诱导表达,经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)检测,对这两种蛋白的原核表达及其产物免疫原性进行分析。结果显示这两种基因在载体pET-32 a中的表达效率要显著高于pMAL-p5X。随后,取高效诱导表达的pET-32 a-RGV-27R产物,经Ni-NTA His-Bind亲和层析分离提纯,获得浓度为1.2 mg/mL的融合蛋白His-RGV-27R,用其免疫动物,制备了抗体27R-Ab,酶联免疫吸附法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测抗体的效价为1∶6.25×106。用经正常大肠杆菌菌液和正常GSTC细胞悬液吸附处理后的抗体作为一抗,对被RGV或ADRV感染的GSTC细胞悬液进行Western Blot检测,并以重组原核质粒表达的融合蛋白His-RGV-27R和His-ADRV-85L作为阳性对照,以正常GSTC细胞悬液为阴性对照,分别从RGV或ADRV感染的GSTC细胞悬液中,检出大小同为31 kD的特异性蛋白条带。本研究证实两种蛙病毒同源早期蛋白RGV-27R和ADRV-85L不仅都能在两栖动物细胞中表达,且具有相同的抗原特性,这为深入研究这类病毒蛋白对蛙病毒复制的影响及其与宿主相互作用的分子机制提供了实验材料。

Language英语
Document Type期刊论文
Identifierhttp://ir.ihb.ac.cn/handle/342005/35722
Collection鱼类生物学及渔业生物技术研究中心_期刊论文
Affiliation1.大连海洋大学
2.中国科学院水生生物研究所
Recommended Citation
GB/T 7714
明成玥,柯飞,张奇亚. 蛙病毒同源蛋白rgv27r和adrv85l的表达及其免疫原性分析[J]. 病毒学报,2019,35(6):926.
APA 明成玥,柯飞,&张奇亚.(2019).蛙病毒同源蛋白rgv27r和adrv85l的表达及其免疫原性分析.病毒学报,35(6),926.
MLA 明成玥,et al."蛙病毒同源蛋白rgv27r和adrv85l的表达及其免疫原性分析".病毒学报 35.6(2019):926.
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