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鲤JAK-STAT信号系统对嗜水气单胞菌感染的响应; TheresponseoftheJAK-STATsignalingsystemincommoncarp CyprinuscarpiotoAeromonashydrophilainfection
Zhou J(周杰)
Subtype硕士
Thesis Advisor高谦,张立强
2017-06
Degree Grantor中国科学院水生生物研究所
Abstract鲤(Cyprinus carpio)是我国重要的淡水经济鱼类,随着集约化养殖的发展,传染性疾病的危害愈加严重。嗜水气单胞菌是一种广泛流行的水产致病菌,每年都给淡水养殖产业造成巨大损失。JAK-STAT信号通路参与白细胞介素、干扰素、生长因子等众多细胞因子的信号传导,对机体免疫调控、细胞增殖和生长都具有重要意义,特别是其在机体抗菌、抗病毒免疫方面的功能机制备受关注。本研究对嗜水气单胞菌感染前后鲤鱼JAK和STAT家族成员的表达状况和时空变化模式进行了分析,并利用酵母双杂交技术探讨鲤JAKs、STATs、SOCSs之间的相互作用。 利用实时荧光定量PCR技术检测了嗜水气单胞菌感染鲤鱼0、6、24和48h,鲤鱼血液、脑、头肾、肝、脾、皮肤、鳃、心、肠和肌肉组织中JAKs和STATs基因的表达水平。研究结果显示:STAT1、STAT2、STAT3、STAT4、STAT5、STAT6、JAK1、JAK2、JAK3、TYK2在鲤鱼感染嗜水气单胞菌后,其组织表达模式存在一定差异。感染后第6h,这些基因总体上表达上调,STAT1、STAT3、STAT6、JAK1在头肾中上调幅度最大, STAT2、STAT4、JAK2则在肠道组织显著上调;在第24h,大部分基因的表达水平较6h时降低;第48h,基本恢复到0小时水平。从嗜水气单胞菌感染后鲤鱼JAKs和STATs基因表达状况变化推测,鱼类JAK-STAT信号系统与机细菌感染免疫反应过程密切相关。 以鲤鱼JAKs基因为钓饵,STATs、SOCSs基因为猎物,构建了pGBKT7-JAK1D、pGBKT7-JAK2D、pGBKT7-TYK2D和pGBKT7-TYK2U钓饵蛋白质粒,以及pGADT7-SOCS1、pGADT7-SOCS2、pGADT7-SOCS3a、pGADT7-SOCS3b、pGADT7-SOCS6、pGADT7-STAT2和pGADT7STAT4猎物质粒,两两共转染AH109酵母感受态,涂SD/-trp-Leu平板培养,挑取该平板上的克隆涂SD/-Trp-Leu-His-Ade/x-α-GAL平板,观察克隆蓝白斑变化。结果显示,阳性对照的菌落变蓝且生长,阴性对照菌落不生长、不变蓝,pGBKT7-JAK1D,pGBKT7-JAK2D,pGBKT7-TYK2D,pGBKT7-TYK2U分别与pGADT7-SOCS1,pGADT7-SOCS2,pGADT7-SOCS3a,pGADT7-SOCS3b,pGADT7-SOCS6,pGADT7-STAT2,pGADT7STAT4成功共转染的菌落均不生长且不变蓝。推测鲤JAKs、STATs蛋白的互作可能需要磷酸化作用。 利用原核表达技术表达并纯化获得了鲤SOCS1、SOCS2、SOCS3a、SOCS3b的重组蛋白,为后续抗体制备奠定基础。关键词:鲤鱼;嗜水气单胞菌;JAK-STAT;SOCS;酵母双杂交
Language中文
Document Type学位论文
Identifierhttp://ir.ihb.ac.cn/handle/342005/31180
Collection学位论文
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GB/T 7714
周杰. 鲤JAK-STAT信号系统对嗜水气单胞菌感染的响应, TheresponseoftheJAK-STATsignalingsystemincommoncarp CyprinuscarpiotoAeromonashydrophilainfection[D]. 中国科学院水生生物研究所,2017.
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