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胚胎发育过程中斑马鱼Ubc13功能的初步研究; Prelimary Studies on the Functions of Zebrafish Ubc13s during Embryogenesis
Mao L(毛琳)
Subtype硕士
Thesis Advisor崔宗斌
2017-04
Degree Grantor中国科学院水生生物研究所
Abstract由核糖体合成和释放的许多新生肽链不具有生物学功能,必须经过翻译后加工,才能成为具有生化活性的蛋白质分子。泛素化是蛋白质翻译后修饰的一种重要方式,蛋白质单泛素化后还可以继续与游离的泛素连接,从而发生多聚泛素化修饰。多聚泛素化主要有Lys48和 Lys63的多聚泛素化,Lys48多聚泛素化主要介导靶蛋白的降解,而Lys63多聚泛素化以非蛋白降解的方式调控靶蛋白的活性。Lys63的多聚泛素化参与细胞内多种生物学过程的调控,如维持正常的细胞周期和DNA复制,它的异常活化常导致生物体的多种疾病包括癌症。Lys63多聚泛素化需要E1、E2和E3三种酶的参与,Ubc13是Lys63多聚泛素化过程中一种重要的E2酶。本研究以斑马鱼为模式生物,利用CRISPR/Cas9基因敲除技术,分别研制出ubc13a-/-和ubc13b-/-单基因敲除的纯合突变体,发现ubc13a-/-和ubc13b-/-单基因敲除纯合突变体均可以正常生存和繁殖。通过品系间杂交和杂交后代自交,我们获得了ubc13a-/-/ubc13b-/-双基因敲除纯合突变体, 它们在受精后第8天时出现肝脏肿大和坏死表型,并在受精后第10天全部死亡。通过吖啶橙染色进行凋亡检测,发现ubc13a-/-/ubc13b-/-双基因敲除纯合突变体整体和肝脏细胞凋亡严重。油红染色则发现其肝脏细胞中存在大量油滴。组织切片的透射电镜分析发现,双基因敲除纯合突变体的肝组织离散、肝细胞变形、细胞核缩小和染色加深等。利用ubc13a-/-/ubc13b-/-双基因敲除纯合突变体,我们进一步研究发现Ubc13完全缺失导致斑马鱼体内被Lys63多聚泛素化的总蛋白明显减少,Notch和Wnt/β-catenin信号通路的活性呈现上调,而Bmp信号通路活性未受显著影响。因此,Ubc13介导的Lys63多聚泛素化通过调控细胞内重要信号通路的活性,在斑马鱼肝脏发育和功能建成中具有重要作用。关键词:Ubc13a;Ubc13b;基因敲除;Lys63多聚泛素化;斑马鱼
Language中文
Document Type学位论文
Identifierhttp://ir.ihb.ac.cn/handle/342005/31151
Collection水生生物分子与细胞生物学研究中心_学位论文
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GB/T 7714
毛琳. 胚胎发育过程中斑马鱼Ubc13功能的初步研究, Prelimary Studies on the Functions of Zebrafish Ubc13s during Embryogenesis[D]. 中国科学院水生生物研究所,2017.
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