| 大鲵短型肽聚糖识别蛋白PGRP-S1和PGRP-S2的真核表达及功能研究 | |
| Alternative Title | Eukaryotic expression and functional characterization of PGRP-S1 and PGRP-S2 in Chinese giant salamander Andrias davidianus |
| 任诗思 | |
| Subtype | 硕士 |
| Thesis Advisor | 昌鸣先 |
| 2017-05 | |
| Degree Grantor | 中国科学院水生生物研究所 |
| Abstract | 作为一类从昆虫到哺乳动物中都高度保守的模式识别受体，肽聚糖识别蛋白（peptidoglycan recognition proteins, PGRPs）通过识别细菌细胞壁成分肽聚糖（peptidoglycan, PGN），区别自己和非己，在机体的天然免疫系统中发挥重要作用。目前，PGRPs在昆虫、软体动物、鱼类、哺乳动物等多个物种中被克隆和研究，其已报道的主要功能包括三个方面：作为模式识别受体介导信号的转导；具有酰胺酶活性，水解细菌细胞壁PGN成分参与调节其他免疫信号通路；作为效应分子，具有直接的杀菌活性。目前关于大鲵PGRPs的报道甚少，本研究构建了两个大鲵的短型肽聚糖识别蛋白PGRP-S1和PGRP-S2的真核表达质粒，并对它们的功能进行了初步的研究。大多数短型肽聚糖识别蛋白均为分泌蛋白，因此，我们首先通过Western blotting技术检测了大鲵PGRP-S1和PGRP-S2的FLAG标签融合蛋白的表达情况。结果显示，大鲵PGRP-S1和PGRP-S2和大多数短型PGRPs一样能分泌到胞外；但大鲵PGRP-S1和PGRP-S2在胞内也可检测到表达。氨基酸序列分析显示，PGRP-S1的N端不含有信号肽，而在PGRP-S2的N端含有17个氨基酸组成的信号肽，这表明PGRPs的分泌可能不依赖N端的信号肽序列。体外抗菌实验显示，过表达PGRP-S1和PGRP-S2能显著抑制迟缓爱德华氏菌（Edwardsiella tarda）在HEK293T细胞内和胞外培养基中的增殖；随后的荧光素酶报告分析的结果也显示，过表达PGRP-S1和PGRP-S2能诱导NF-κB启动子的活性。这些结果表明大鲵PGRP-S1和PGRP-S2可能参与调节NF-κB相关的信号通路，在抗菌天然免疫应答中具有重要作用。此外，为了进一步研究大鲵PGRP-S1和PGRP-S2的生物学功能，我们分析了PGRP-S1和PGRP-S2对两种不同类型的肽聚糖（Lys-type PGN和Dap-type PGN）的结合能力及酰胺酶活性。结果表明，大鲵PGRP-S1和PGRP-S2均能结合Lys-type和Dap-type PGN；PGRP-S2具有Zn2+依赖的酰胺酶活性，能够水解Lys-type和Dap- type PGN，而PGRP-S1不具有酰胺酶活性。 |
| Language | 中文 |
| Document Type | 学位论文 |
| Identifier | http://ir.ihb.ac.cn/handle/342005/31117 |
| Collection | 鱼类生物学及渔业生物技术研究中心_学位论文 |
| Recommended Citation GB/T 7714 | 任诗思. 大鲵短型肽聚糖识别蛋白PGRP-S1和PGRP-S2的真核表达及功能研究[D]. 中国科学院水生生物研究所,2017. |
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| 大鲵短型肽聚糖识别蛋白PGRP-S1和P（3058KB） | 学位论文 | 限制开放 | CC BY-NC-SA | Application Full Text | ||
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