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大鲵短型肽聚糖识别蛋白PGRP-S1和PGRP-S2的真核表达及功能研究
Alternative TitleEukaryotic expression and functional characterization of PGRP-S1 and PGRP-S2 in Chinese giant salamander Andrias davidianus
任诗思
Subtype硕士
Thesis Advisor昌鸣先
2017-05
Degree Grantor中国科学院水生生物研究所
Abstract作为一类从昆虫到哺乳动物中都高度保守的模式识别受体,肽聚糖识别蛋白(peptidoglycan recognition proteins, PGRPs)通过识别细菌细胞壁成分肽聚糖(peptidoglycan, PGN),区别自己和非己,在机体的天然免疫系统中发挥重要作用。目前,PGRPs在昆虫、软体动物、鱼类、哺乳动物等多个物种中被克隆和研究,其已报道的主要功能包括三个方面:作为模式识别受体介导信号的转导;具有酰胺酶活性,水解细菌细胞壁PGN成分参与调节其他免疫信号通路;作为效应分子,具有直接的杀菌活性。目前关于大鲵PGRPs的报道甚少,本研究构建了两个大鲵的短型肽聚糖识别蛋白PGRP-S1和PGRP-S2的真核表达质粒,并对它们的功能进行了初步的研究。大多数短型肽聚糖识别蛋白均为分泌蛋白,因此,我们首先通过Western blotting技术检测了大鲵PGRP-S1和PGRP-S2的FLAG标签融合蛋白的表达情况。结果显示,大鲵PGRP-S1和PGRP-S2和大多数短型PGRPs一样能分泌到胞外;但大鲵PGRP-S1和PGRP-S2在胞内也可检测到表达。氨基酸序列分析显示,PGRP-S1的N端不含有信号肽,而在PGRP-S2的N端含有17个氨基酸组成的信号肽,这表明PGRPs的分泌可能不依赖N端的信号肽序列。体外抗菌实验显示,过表达PGRP-S1和PGRP-S2能显著抑制迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)在HEK293T细胞内和胞外培养基中的增殖;随后的荧光素酶报告分析的结果也显示,过表达PGRP-S1和PGRP-S2能诱导NF-κB启动子的活性。这些结果表明大鲵PGRP-S1和PGRP-S2可能参与调节NF-κB相关的信号通路,在抗菌天然免疫应答中具有重要作用。此外,为了进一步研究大鲵PGRP-S1和PGRP-S2的生物学功能,我们分析了PGRP-S1和PGRP-S2对两种不同类型的肽聚糖(Lys-type PGN和Dap-type PGN)的结合能力及酰胺酶活性。结果表明,大鲵PGRP-S1和PGRP-S2均能结合Lys-type和Dap-type PGN;PGRP-S2具有Zn2+依赖的酰胺酶活性,能够水解Lys-type和Dap- type PGN,而PGRP-S1不具有酰胺酶活性。
Language中文
Document Type学位论文
Identifierhttp://ir.ihb.ac.cn/handle/342005/31117
Collection鱼类生物学及渔业生物技术研究中心_学位论文
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GB/T 7714
任诗思. 大鲵短型肽聚糖识别蛋白PGRP-S1和PGRP-S2的真核表达及功能研究[D]. 中国科学院水生生物研究所,2017.
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