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题名: 四膜虫rDNA表达载体的改造及用于异源基因的高效表达
作者: 袁冬霞 ; 冯立芳 ; 熊杰 ; 缪炜
关键词: 四膜虫 ; rDNA ; pD5H8 ; pD5H8-HGFP ; 异源基因表达
刊名: 基因组学与应用生物学
发表日期: 2013
期: 4, 页:548-556
收录类别: CSCD
部门归属: 中国科学院水生生物研究所,水生生物多样性与保护重点实验室; 浙江工商大学食品与生物工程学院
摘要: 基于四膜虫小核rDNA改造得到的pD5H8载体,在转染进接合生殖时期的四膜虫后能发育成9000~10000拷贝的大核rDNA,因此pD5H8载体是四膜虫异源基因表达的研究热点;但其载体上匮乏合适的克隆位点和无启动子结构阻碍了该载体的进一步发展。本研究在四膜虫启动子HSP70-2和终止子HSP70-1之间,通过稀有酶切位点I-SceⅠ导入细菌绿色荧光蛋白(HGFP)这一筛选标记,由此组成的DNA片段(HSP70-25’UTR-I-SceⅠ-HGFP-I-SceⅠ-HSP70-13’UTR)整合进pD5H8,将之改造成pD5H8-HGFP表达载体。来自真核生物的绿色荧光蛋白(GFP)藉由I-SceⅠ酶切位点一步导入pD5H8-HGFP表达载体后,在四膜虫中大量表达且具有生物学活性。因此,改造后的pD5H8-HGFP表达载体拥有一步法引入异源基因,几乎无酶切位点的限制,有效的筛选标记,高效的异源基因表达能力,以及环境友好、便捷可控等诸多优点,这对于深入开展四膜虫基因功能的过表达研究和开发异源基因在四膜虫这一真核表达系统中的应用奠定了技术基础。
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内容类型: 期刊论文
URI标识: http://ir.ihb.ac.cn/handle/342005/19500
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袁冬霞;冯立芳;熊杰;缪炜;.四膜虫rDNA表达载体的改造及用于异源基因的高效表达,基因组学与应用生物学,2013,(4):548-556
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