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一步法引入外源基因的四膜虫表达载体及构建方法和应用
袁冬霞; 缪炜
Rights Holder中国科学院水生生物研究所
Date Available2012-03-14
Country中国
Subtype发明
Abstract本发明公开了一种一步法引入外源基因的四膜虫表达载体及构建方法和应用。利用质粒HSP702-GFP和THX-HGFP,通过PCR和酶切连接等方法构建中间载体TH-HGFP;利用质粒TH-HGFP、PET23a-GST和pCDNA3.1-FLAG,通过PCR和酶切连接等方法分别构建中间载体TH-HIS-HGFP、TH-GST-HGFP和TH-FLAG-HGFP;利用上述中间载体分别与质粒pD5H8,通过PCR和酶切连接等方法构建四膜虫表达载体:pD5H8-HGFP,pD5H8-HIS-HGFP,pD5H8-GST-HGFP,pD5H8-FLAG-HGFP。该系列载体均含有绿色荧光筛选标记HGFP,可用于重组子的高通量筛选;该系列载体可替代盒式结构HGFP两侧均含反向的I-SceI稀有酶切位点,引入外源基因时,将带I-SceI接头的外源基因片段与用I-SceI处理后的该系列载体一步连接,即可得到含外源基因的四膜虫表达载体。本发明操作方便快捷,引入外源基因的四膜虫表达载体转染四膜虫后可实现外源基因的高效表达。
Application Date2011-06-16
Application NumberCN201110162653.6
Document Type专利
Identifierhttp://ir.ihb.ac.cn/handle/342005/16648
Collection水生生物分子与细胞生物学研究中心_专利
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GB/T 7714
袁冬霞,缪炜. 一步法引入外源基因的四膜虫表达载体及构建方法和应用. ZL201110162653.6.
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