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斑马鱼胚胎细胞中Cre/lox介导的定点整合
秦瑶
Subtype硕士
Thesis Advisor朱作言 ; 汪亚平
2006-06-14
Degree Grantor中国科学院水生生物研究所
Place of Conferral水生生物研究所
KeywordCre/lox系统 重组酶介导的盒式交换 定点整合 斑马鱼
Abstract外源基因的随机整合阻碍了传统转基因方法在鱼类定向育种领域的应用。利用基因打靶技术有望实现外源基因的定点整合:控制外源基因的整合位点,整合率和时空表达。Cre/lox位点特异性重组系统介导的盒式交换反应是一种高效简单的基因定点整合新方法。本研究证实了该方法在鱼类中的可行性,并以斑马鱼为模型,初步建立了基于Cre/lox系统的鱼类定点整合技术。本文共五章:第一章:综述传统转基因方法的局限性,鱼类基因打靶技术的发展,Cre/lox系统在转基因中的应用和在斑马鱼中应用的研究现状。第二章:盒式交换反应载体的构建。构建了两种flox重组质粒:靶位载体pCMVlox66CreintEGFPlox2272和打靶载体plox71RFPlox2272。 第三章:共注射Cre RNA和两种flox重组质粒入斑马鱼受精卵,红色荧光的出现和PCR检测及测序结果表明打靶载体上的RFP报告基因高效置换了靶位载体上lox位点间的DNA片断。证实了Cre/lox系统介导的盒式交换反应在斑马鱼体内的可行性。第四章:采用传统转基因方法建立转pCMVlox66CreintEGFPlox2272的斑马鱼品系,该品系含高效表达外源基因的靶位并自身表达一定的Cre酶。将打靶载体plox71RFPlox2272注射入F2代受精卵中,成功筛选到三尾显示红色荧光的斑马鱼。PCR和测序进一步证实了盒式交换反应的发生。由此,初步建立了基于Cre/lox系统的鱼类定点整合技术。
Pages75
Language中文
Document Type学位论文
Identifierhttp://ir.ihb.ac.cn/handle/342005/12078
Collection学位论文
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GB/T 7714
秦瑶. 斑马鱼胚胎细胞中Cre/lox介导的定点整合[D]. 水生生物研究所. 中国科学院水生生物研究所,2006.
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