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题名: 鱼类亚科间核质互作及核再程序化过程中差异表达基因的研究
作者: 裴得胜
答辩日期: 2006-06-14
导师: 朱作言 ; 孙永华
授予单位: 中国科学院水生生物研究所
授予地点: 水生生物研究所
学位: 博士
关键词: 核质互作 ; 克隆胚胎 ; 转录分析 ; RNA 的异质性 ; 再程序化
摘要: 在本研究中,我们利用两种实验鱼——斑马鱼和稀有鮈鲫,通过核移植技术将前者的细胞核植入后者的去核卵,形成异种间克隆胚胎。我们利用该模型开展了关于细胞质和细胞核间的相互作用及克隆胚胎中细胞核再程序化机制的研究。1.利用克隆出的稀有鮈鲫的COXI基因,构建进化树,结果确定斑马鱼和稀有鮈鲫间的克隆关系为亚科间的克隆。另外,克隆出斑马鱼的GAPDH,并证明GAPDH 基因可以作为鱼类亚科间克隆胚胎转录分析的良好内参。2.利用斑马鱼和稀有鮈鲫的克隆胚胎模型,结合抑制性消减杂交差异显示技术,建立了正向、反向两个差减cDNA文库。通过斑点杂交筛选得到52个差异表达基因并进行功能分类。并对其中28 个基因使用RT-PCR和荧光定量RT-PCR作进一步验证。结果表明:由于核质互作影响使鱼类亚科间的克隆胚胎中存在着蛋白质翻译上的缺陷、染色质重构的问题及线粒体异质性影响。3.针对线粒体基因COXI在克隆胚胎中过量表达的现象,进一步对其成份进行分析,结果发现斑马鱼和稀有鮈鲫的COXI在sphere时期的克隆胚胎中存在共表达现象。Real time RT-PCR分析表明斑马鱼和稀有鮈鲫共同转录的COXI中主要来自稀有鮈鲫受体。另外,COXI序列比较证明稀有鮈鲫的COXI基因不存在RNA编辑现象。4.利用候选基因分析方法,分析了发育过程中的关键基因SMAD2、ADAR、OCT4和SMAD6在克隆胚胎中再程序化能力,SMAD6只在克隆胚胎表达可能对细胞核的再程序化有着明显的影响。另外,用RACE方法克隆出三个在克隆胚胎中过量表达的全长基因Kg6、K31、K23,并进行功能特性分析。亚细胞定位分析表明K23蛋白在细胞核和细胞质中均有分布,但K31蛋白则只存在于胞浆中并能引起细胞核产生畸形,最后导致细胞死亡。这提示克隆胚胎中过量表达的K31对胚胎的成活率有着重要影响。
语种: 中文
内容类型: 学位论文
URI标识: http://ir.ihb.ac.cn/handle/342005/12010
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鱼类亚科间核质互作及核再程序化过程中差异表达基因的研究.裴得胜[d].中国科学院水生生物研究所,2006.20-25
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