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题名: 鳜鱼弹状病毒的分离、鉴定及基因组测序分析
作者: 陶建军
答辩日期: 2006-06-19
导师: 张奇亚
授予单位: 中国科学院水生生物研究所
授予地点: 水生生物研究所
学位: 博士
关键词: 鳜鱼 ; 弹状病毒 ; 挑斑分离 ; SCRV ; 全基因组 ; 原核表达
摘要: 在证实球形和弹状两种鳜鱼病毒共感染引起宿主细胞超微变化的基础上,利用电镜技术,辅助进行病毒挑斑分离,围绕鳜鱼弹状病毒的鉴定、全基因组测序及功能基因表达、分析等开展研究。主要研究方法和结果如下: 1、经7 轮挑斑,从共感染的两种病毒中,分离出一端为圆锥体、另一端为平底的典型子弹状形态,大小约为76-118 nm X 29-52 nm 的SCRV。 2、细胞系敏感性测定结果表明,GCF、FHM和EPC细胞对SCRV敏感,CHSE-214和RTG-2对SCRV不敏感。理化性质测定表明,SCRV 对氯仿、温度和pH 敏感,在46℃水浴1 小时后病毒完全灭活;当在pH 低于3 或高于10 的环境中,SCRV 也彻底灭活。 3、SDS-PAGE 电泳显示,SCRV 有五条主要蛋白带;琼脂糖凝胶电泳显示,SCRV基因组RNA大学约为11kb。 4、对SCRV 全基因组序列进行了克隆和分析。SCRV基因组全长为11545 个核苷酸。五个基因及非编码区的结构排列为:3’ Leader-N-P-M-G-L-Trailer5’。其中M 基因含有两个独立的互不重叠的开放阅读框(open reading frame, ORF),大的ORF 编码M 蛋白,小的ORF 编码一个5.4 kDa 的未知蛋白(暂称为Ms),而Ms 在已知的所有弹状病毒基因组中都不存在。氨基酸序列比对结果显示:SCRV N、P、M 和G 蛋白均与鱼类弹状病毒903/87相应蛋白的同源性最高,分别为41.5%、14.8%、25.8%和25.3%。在903/87 L 蛋白尚未测出全序列的情况下,SCRV L 蛋白显示与人类一种弹状病毒(Chandipura virus,CHPV)L 蛋白同源性最高,为44.7%。分别构建五个基因的遗传进化树,结果显示SCRV N、P、M 和G 基因均与903/87 相应基因聚为一支,L 基因则与SVCV L 基因聚为一支。 5、分别对SCRV N 与M 基因进行了原核表达,获得了大小分别约为73和38kDa的融合蛋白,并制备了相应蛋白的抗体。所制备的抗体能够特异性识别SCRV 的N 和M 蛋白。采用免疫荧光技术对N 和M 蛋白细胞内的分布进行了检测,结果表明,病毒在细胞内复制时,N 和M 蛋白分别分布于胞质中及胞膜周围。另外,还测定了兔抗SCRV N 蛋白血清的体外抗病毒活性,显示一定时间内,抗血清具有抑制SCRV 在GCF 细胞中复制的效果。
语种: 中文
内容类型: 学位论文
URI标识: http://ir.ihb.ac.cn/handle/342005/11994
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鳜鱼弹状病毒的分离、鉴定及基因组测序分析.陶建军[d].中国科学院水生生物研究所,2006.20-25
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