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题名: 银鲫和彩鲫两个卵巢特异表达基因的鉴定和特征分析
作者: 王红莹
答辩日期: 2006-01-21
导师: 桂建芳
授予单位: 中国科学院水生生物研究所
授予地点: 水生生物研究所
学位: 博士
关键词: CB102 ; 凝集素 ; 皮质颗粒 ; YA2 ; 免疫荧光定位 ; 母源因子
摘要: 实验室先前采用抑制性差减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)的方法分别构建了特异于银鲫和彩鲫完全长成卵母细胞的cDNA差减文库用来比较天然雌核发育银鲫与其亲缘种-两性生殖彩鲫完全长成的卵母细胞(fully grown oocyte)中mRNA的差异,并且克隆到一系列基因。本论文在此基础上,重点对前面已克隆到的两个差异表达基因CB102和YA2进行分子特征鉴定和表达特征研究。 CB102 cDNA全长1059bp,5’非编码区长98bp,3’非编码区长176bp。该基因编码一个有255个氨基酸的蛋白。其氨基酸序列在银鲫和彩鲫中完全一样。 组织特异性RT-PCR和Western blot分析结果表明其只在银鲫和彩鲫卵巢中转录和表达。对卵巢组织切片进行免疫荧光分析表明CB102只在卵巢中的卵母细胞中表达。对不同发育阶段的银鲫和彩鲫卵母细胞和受精后卵母细胞进行免疫荧光定位分析表明CB102 在卵子成熟过程中存在的转位和受精后的释放现象,与皮质颗粒进行的免疫荧光共定位显示CB102定位于皮质颗粒中。 采用脱唾液酸胎球蛋白亲和层析方法纯化了CB102天然蛋白,血细胞凝集活性分析表明CB102对兔血细胞有凝集作用,细菌凝集活性分析表明CB102对革兰氏阴性菌和阳性菌都有凝集作用,抑菌活性分析表明CB102对革兰氏阴性菌有明显的抑制作用。   YA2是银鲫卵母细胞中特异表达的一个编码66个氨基酸的小肽。 在GenBank中进行同源比对后表明预测的YA2氨基酸序列与斑马鱼中的小核核糖核蛋白多肽C (small nuclear ribonucleoprotein polypeptide C) 的氨基酸序列最相似。YA2和斑马鱼SNRPC的氨基酸一致率为47%。与斑马鱼的SNRPC比较后发现,YA2的整个氨基酸序列基本上位于斑马鱼SNRPC的C末端。 利用制备的抗YA2蛋白的多克隆抗体,对不同发育时段的卵母细胞的冰冻切片进行了免疫组织化学检测分析,并且观测到了YA2蛋白在卵母细胞中的特异分布。阳性信号显示,YA2蛋白定位在卵母细胞生发泡 (germinal vesicle)中的类核仁物质中并且随着卵母细胞的发育呈现出动态变化。 对银鲫早期胚胎发育不同时期进行的RT-PCR分析和Western blot分析表明YA2可能是一个母源因子。 因此我们将YA2基因命名为银鲫卵母细胞特异的SNRPC,简称为CagOSNRPC。
语种: 中文
内容类型: 学位论文
URI标识: http://ir.ihb.ac.cn/handle/342005/11954
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银鲫和彩鲫两个卵巢特异表达基因的鉴定和特征分析.王红莹[d].中国科学院水生生物研究所,2006.20-25
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