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牙鲆热休克蛋白家族基因的克隆、鉴定及其表达分析
董彩文
Subtype博士
Thesis Advisor桂建芳
2006-06-11
Degree Grantor中国科学院水生生物研究所
Place of Conferral水生生物研究所
Keyword热休克蛋白 压力应答 牙鲆囊胚细胞 弹状病毒 差减cdna文库 免疫相关基因
Abstract本文运用抑制性差减杂交技术,构建了灭活大菱鲆弹状病毒诱导的牙鲆囊胚培养细胞和正常对照细胞间差异表达基因的差减cDNA文库。通过构建SMART-cDNA文库并结合RACE技术,从该细胞模型系统中克隆、鉴定了10个Hsp家族基因一个鱼类蛋白质精氨酸甲基转移酶基因的全长cDNA序列和PoCctz基因的部分cDNA序列。 进一步利用Real-time PCR对11个热休克蛋白家族基因在热休克和灭活病毒诱导下的表达时序的研究表明:在灭活病毒诱导下,牙鲆Hsp基因表达特征与在热休克状态下的表达特征相似,均表现为上调表达,但强度要弱于在热休克状态下最大诱导强度,而且持续时间短;其中诱导型的Hsp的上调表达水平远高于组成型Hsp, 其余Hsp家族基因则表现为中等程度的上调表达。而PoCctz和PoCRT基因在病毒诱导下诱导表达的最大诱导强度要大大强于在热休克状态下的最大诱导强度,且启动时间滞后;而且其表达时序与PoMx 基因极其吻合。 对PoHsp70、PoHsp90和PoCRT基因进行原核表达并用金属亲和层析纯化了融合蛋白并制备了多克隆抗体。利用Western blot在蛋白水平也检测到了PoHsp70、PoHsp90和PoCRT蛋白在热休克状态和病毒诱导下的上调表达,同时组织表达特异性分析表明这几种热休克蛋白是遍在表达的。最后,对Cctz,PRMT1和钙网蛋白基因的诱导表达特性在鱼体内进行了验证,在几种主要组织内诱导结果也表现为上调表达。
Pages178
Language中文
Document Type学位论文
Identifierhttp://ir.ihb.ac.cn/handle/342005/11946
Collection学位论文
Recommended Citation
GB/T 7714
董彩文. 牙鲆热休克蛋白家族基因的克隆、鉴定及其表达分析[D]. 水生生物研究所. 中国科学院水生生物研究所,2006.
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